多糖的分子量与分子量分布测定法
附录Ⅴ                       H  多糖的分于量与分子量分布测定法

    照高效液相色谱法(附录Ⅴ D)测定。
    1．对仪器的一般要求
    色谱柱为测多糖专用凝胶柱(按所测样品的分子量大小选择特定排阻范围的凝胶柱)。检测器为示差折
  光检测器。
    2．系统适用性试验
    按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，规定分析状态下色谱柱的最小理论板数(n)和供试品在该分
  析状态下的分配系数(K<[d]>)应达到规定的要求。
                                       t<[R]>-t<[O]>
                              K<[d]>＝————————
                                       t<[T]>-t<[O]>
  式中  t<[R]>为供试品峰的保留时间；
        t<[O]>为完全被填料颗粒网孔排阻的大分子的保留时间，一般指蓝色葡聚糖的保留时间；
        t<[T]>为能自由进出填料颗粒网孔的小分子的保留时间，一般指葡萄糖的保留时间。
    3．测定法
    (1)系统校正  根据供试品分子量大小，一般选用5个已知分子量的多糖标准品(常用的为葡聚糖)分别
  用流动相制成每1ml中约含10mg的标准溶液，分别取上述标准溶液25μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。由
  GPC专用软件绘制标准曲线，得线性回归方程：
                              lgM<[w]>=a+bt<[R]>
  式中  M<[w]>为标样的已知重均分子量；
        t<[R]>为标样的保留时间。
    (2)样品测量  取供试品溶液25μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按下式计算分子量：
                           Mn＝∑RI<[i]>／∑(RIi／M<[i]>)
                           Mw＝∑(RI<[i]>M<[i]>)／∑RI<[i]>
                           D＝M<[w]>／M<[n]>
式中  M<[n]>为数均分子量；
      RI<[i]>为样品i级分的物质量，即供试品在保留时间i的峰高；
      M<[i]>为样品i级分的分子量，即供试品在保留时间i的分子量。
    4．结果处理
    采用GPC专用软件，可获得供试品归一化色谱图，微分、积分分子量分布图，各时间点的分子量(片段数
据)和各种平均分子量。根据供试品需要选择各项测定结果。

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